O Que é um Tubo Germinativo? Como é Sua Formação?

A micose, uma infeção fúngica (leveduras, bolores, dermatófitos), é um patógeno que nos afeta cada vez mais frequentemente nos dias de hoje. Estão mais sujeitos a isso (mas não somente esses), quem faz uso intenso de tratamentos com antibióticos, ou então aqueles considerados pacientes de risco, seja os que precisam se submeter a cuidados intensivos e também  os pacientes com a imunidade suprimida ou comprometida.

O que é um Tubo Germinativo? Como é sua Formação?

Tubo germinativo é um teste de triagem que é usado para diferenciar candida albicans de outras leveduras. A formação de tubo germinativo foi primeiramente relatada por Reynolds e Braude em 1956. Quando a candida é cultivada em soro humano ou de ovelha a 37° C por 3 horas, forma um tubo germinativo, que pode ser detectado com filmes de KOH úmido como filamentosos. excrescimento que se estende de células de levedura. É positivo para candida albicans e candida dubliniensis. Aproximadamente 95 a 97% dos isolados de candida albicans desenvolvem tubos germinativos quando incubados em meio proteico.

A formação de tubo germinativo está associada ao aumento da síntese de proteínas e ácido ribonucleico. As soluções de tubos germinativos contêm caldo de soja tríptica e soro bovino fetal, nutrientes essenciais para a síntese de proteínas. É liofilizado para estabilidade. Tubo germinativo é um dos fatores de virulência de candida albicans. Este é um teste rápido para a identificação presuntiva de candida albicans.

O teste terá resultado positivo quando houver extensão curta de hifas (filamentosas) surgindo lateralmente de uma célula de levedura, sem constrição no ponto de origem. Tubo de germe é metade da largura e 3 a 4 vezes o comprimento da célula de levedura e não há presença de núcleo. O teste será negativo quando não houver nenhuma extensão de hiflo (filamentosa) que se origine de uma célula de levedura ou uma extensão curta de hifala comprimida no ponto de origem.

Procedimento do Teste e suas Limitações

1. Coloque 0,5 ml de ovelha ou soro humano em um pequeno tubo.
   Nota: O soro bovino fetal também pode ser usado em vez do soro humano.
2. Usando uma pipeta Pasteur, toque em uma colônia de fermento e emulsione-a suavemente no soro.
   Nota: Demasiado grande de um inóculo inibirá a formação do tubo germinativo.
3. Incubar o tubo a 37 ° C por 2 a 4 horas.
4. Transferir uma gota do soro para um slide para exame.

1. Posicione na lamela e examine microscopicamente sob objetivos de baixa e alta potência

• Candida tropicalis pode formar pseudohyphae cedo que pode ser falsamente interpretado como tubos germinativos.
• A levedura antigamente denominada candida stellatoidea também produz tubos germinativos; no entanto, foi combinado com candida albicans e não existe mais como espécie separada.
• Este teste é apenas parte do esquema geral para identificação de leveduras. Mais testes são necessários para uma identificação definitiva.

Candida Albicans

Candida albicans é a mais importante e mais conhecida espécie de levedura do gênero candida. Candida albicans é um organismo que vive no estado natural das membranas mucosas do ser humano. É encontrado em 80% da população e geralmente não causa nenhuma doença ou sintoma em particular. É um organismo saprófito comensal.

Candida albicans é um organismo diploide que tem oito pares de cromossomos, sendo o maior chamado R, sendo o seguinte numerado de 1 a 7 em tamanho decrescente. Seu genoma é de aproximadamente 16 Mb (haploide) e codifica aproximadamente 6.400 genes. O código genético de candida albicans tem uma peculiaridade. O codon CUG codifica para serina e não para leucina.

Existem várias técnicas que podem identificar candida albicans no laboratório, por exemplo:

• o teste do tubo germinativo positivo; de fato candida albicans irá formar uma hifa sem constrição, uma vez colocado em plasma de coelho ou ovelha a 37 graus Celsius;
• o teste do clamidósporo (esporos de propagação vegetativa de espessura de parede) será positivo em meio RAT devido à presença de tween;
• teste de urease (enzima que catalisa a reação para a conversão da ureia em dióxido de carbono e amoníaco) negativo em meio de Christensen (citrato de christensen: um tipo de cultura utilizado para o crescimento de bactérias);
• colônia branca cremosa e brilhante em ágar sangue (um meio de cultura e isolamento de bactérias não exigentes em necessidade de elementos especiais, tais como o Streptococcus) ou sabouraud (agar de Sabouraud, um meio de isolamento dos fungos).

Ciclo de Vida Candida Albicans

O fato de candida albicans ser classificado como um fungo assexuado pode parecer surpreendente, dada a sua filogenética perto com levedura sexados tais como saccharomyces cerevisiae. Além disso, genes envolvidos no acasalamento e meiose em saccharomyces cerevisiae possuem ortólogos em candida albicans. A reprodução de candida albicans é predominantemente clonal, com trocas genéticas limitadas entre indivíduos.

No entanto, a descoberta de genes de acasalamento sugere que candida albicans manteve a capacidade de reproduzir e recombinar. Estes genes que acoplam de chamada MTL (“m ating t ype- l ike”), tem grandes semelhanças com genes MAT encontrados com saccharomyces cerevisiae , com a diferença notável que candida albicans tem 4 genes MTL não 3 como é o caso em saccharomyces cerevisiae.

A maioria das estirpes de candida albicans são heterozigóticas para estes loci e apenas 3 a 7% das estirpes encontradas na natureza são homozigóticas. Em contraste com saccharomyces cerevisiae, para o qual todas as células são competentes, apenas cepas de candida albicans tendo sido submetidas a uma mudança fenotípica de branco para opaco são competentes.

Existem duas conexões principais entre o sistema de acasalamento e a conversão branco-opaco: 1- é o locus MTL que regula a capacidade de candida albicans de realizar a troca e 2- o acasalamento de células de fase opaca é aproximadamente 10 ^ 6 vezes mais eficiente que o das células na fase branca. O interesse por candida albicans ligar os dois sistemas pode ser garantir que os indivíduos só possam se recombinar em nichos específicos.

De fato, as células na fase opaca são mais frágeis que as células na fase branca e são instáveis. O acasalamento de duas células de candida albicans resulta em uma célula tetraploide, que deve perder alguns de seus cromossomos para restaurar a diploidia. Na maioria dos fungos, esse processo é feito através de uma meiose que completa um ciclo sexual. Entretanto, em candida albicans, apenas um ciclo parassexual pôde ser identificado in vitro, um ciclo envolvendo uma perda coordenada de cromossomos supranumerários sobre as divisões celulares.

Ainda é possível, entretanto, que a candida albicans possa sofrer meiose. Desde o estudo de seu genoma identificaram vários ortólogos de genes envolvidos neste processo em outras leveduras: o locus MTL, NDT80, etc. Por outro lado, um número de genes importantes para a meiose parecem recair no genoma de candida albicans, sugerindo que, se a meiose pode tomar lugar nesta levedura, a sequência deve ser diferente a partir de outros fungos.